對蛋白亞細胞定位的認知可能表明,蛋白可能在許多細胞進程中發(fā)揮作用。如果與下面所列的其中一種細胞器特異性試劑共定位,那么可確認目的蛋白的亞細胞位置。雖然這些細胞器標記物可用作強大的免疫熒光工具,但它們還可用作碎裂細胞裂解物的蛋白質(zhì)印跡對照。
這些蛋白的表達可能在不同細胞和組織中有所不同。
熒光蛋白的發(fā)光原理在于其發(fā)色基團經(jīng)一定波長的光(激發(fā)光)照射后被激活,并將能量以光能形式釋放,這時我們就能在熒光顯微鏡下看到日思夜想的熒光色啦!
但由于能量不能全以光的形式輻射出來,所以熒光蛋白的發(fā)射光(熒光)的波長比激發(fā)光長。
那么我們是怎么將熒光蛋白分類的呢?通常,人們按發(fā)射波長來分類并定義其顏色(下圖)。
RFPs(紅色熒光蛋白):
mCherry具有優(yōu)異光穩(wěn)定性,通用紅色單體(但融合表達時有較弱的齊聚效應)
tdTomato具有mCherry相同的光穩(wěn)定性,亮度強,是追蹤表達水平的理想選擇,但為串聯(lián)二聚體,可以在融合標簽大小不干擾蛋白質(zhì)功能的情況下使用
mStrawberry信號亮的紅色單體,但光穩(wěn)定性要弱于mCherry
DsRed是細胞毒性小的RFP
mApple在蛋白的融合表達中是mCherry不錯的替代物,但其光穩(wěn)定性要遠弱于mCherry
mKate2從參數(shù)方面考量是綜合亮度、光穩(wěn)定性和齊聚性的RFP。
OFPs(橙色熒光蛋白):
mOrange橙色單體
YFPs(黃色熒光蛋白):
mVenus是亮度*的黃色單體
GFPs(綠色熒光蛋白):
EGFP
BFPs(藍色熒光蛋白):
mTagBFP2穩(wěn)定,成熟快、亮度極亮的藍色單體
上面是通用一些熒光蛋白參數(shù),再好的載體也需要找對合適的光源,光源的選擇對于載體信號的激發(fā)也是*的,美國LUYOR公司實驗室儀器事業(yè)部致力于研究和開發(fā)熒光觀測裝備,其產(chǎn)品系列有 LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀測燈,LUYOR-3430、LUYOR-3260單熒光蛋白觀測手電筒。熒光是各種各樣細胞生物學、神經(jīng)系統(tǒng)學及其他領域研究中的一種強大和廣泛使用的工具。LUYOR的LUYOR-3415RG和LUYOR-3430、LUYOR-3260除了可用于篩選轉(zhuǎn)基因生物外,還可以用于樣本的預篩選、輔助解剖、用于珊瑚研究等
LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的用途:
用于檢測、篩選轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白(GFP)和紅色熒光蛋白(DsRed)基因的植物、動物及微生物,如水稻、玉米、斑馬魚、小鼠、細:菌、真菌等等...
LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的產(chǎn)品優(yōu)勢:
1. 大功率輸出,無需暗室,也可輕松激發(fā)熒光。
2.檢測效率高,黑暗中檢測一目了然
3.LED壽命50000h,且系統(tǒng)穩(wěn)定,可長時間使用
4.直接檢測,而無需用底物顯色,所以安全,對被檢測對象無傷害
激發(fā)光源激發(fā)出綠色熒光時,用黃色濾光鏡觀測,可檢測含綠色熒光蛋白(GFP)的生物;激發(fā)光源激發(fā)紅色熒光時,用紅色濾光鏡觀測,可檢測含紅色熒光蛋白(DsRed)的生物。
注:
1. LUOYR-3415R用于觀測綠色熒光蛋白
GFP:綠色熒光; fluorescein熒光素
2. LUOYR-3415C用于觀測黃色熒光蛋白
YFP:黃色熒光蛋白; Venus:金色; Lucifer Yellow:熒光黃
3. LUOYR-3415G用于觀測紅色熒光蛋白
DsRed:紅色熒光蛋白; TdTomato:番茄紅
4. LUOYR-3415V用于觀測紫色熒光蛋白
CFP:青色熒光蛋白; BFP:堿性胎兒蛋白
5. LUOYR-3415U用于觀測:
DAPI:藍色熒光
LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的物理技術(shù)參數(shù):
波長:可任意選擇2種波長:365nm,400nm, 450nm, 485nm,520nm
質(zhì)量:凈重0.9kg,毛重:4kg,尺寸:180x200mm(長x高),頭部直徑120mm。
功率:單波長15w,總功率27w。
輸入電壓:交流100-260v,頻率50/60Hz。
包裝箱尺寸:400x300x150mm(長x寬x高)
距燈150mm處照射直徑為180mm。
LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的標準配置:
luv-50觀察眼鏡,luv-30觀察眼鏡,說明書,合格證,保修卡,鋁合金手提箱。
LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的主要產(chǎn)品應用:
檢測轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白(GFP)基因、紅色熒光蛋白(DsRed)基因植物:水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥
檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因動物:小鼠、兔子、猴子等;
檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因微生物:細菌、真菌、酵母等;
檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達;
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主營產(chǎn)品:黑光燈,探傷燈,紫外線探傷燈,LED磁粉探傷燈,熒光檢漏燈,熒光檢漏劑,檢漏手電筒,脫脂檢測燈
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