EMSA中紫外交聯(lián)時間怎么確定?將尼龍膜置于濾紙上干燥片刻,在紫外交聯(lián)儀中將轉(zhuǎn)有DNA的一面向上用120mJ/cm2能量輻照交聯(lián),紫外交聯(lián)儀的紫外傳感器會根據(jù)當前紫外交聯(lián)儀的紫外線強度自動計算輻照時間,當輻照能量達到設定值時候,會自動停止輻照。
紫外照射的目的在于使DNA 中的一小部分T 與膜表面帶正電的氨基基團之間形成交聯(lián)(Church and Gilbert 1984)。紫外照射不能過度,否則將造成堿基T之間發(fā)生共價結(jié)合而降低雜交信號。交聯(lián)時將膜上帶有DNA的一面朝向紫外光源。
紫外交聯(lián)儀設置時間的步驟:按壓智能紫外交聯(lián)儀UCL-3500操作面板上program按鍵,選擇時間模式,通過數(shù)字按鍵,輸入需要照射的時間,然后按壓enter按鍵,這樣需要的交聯(lián)時間就成功設置好了,按star按鍵,紫外交聯(lián)儀開始輻照,屏幕顯示倒計時時間,交聯(lián)時間結(jié)束后,交聯(lián)儀紫外燈自動停止運行。
智能紫外交聯(lián)儀UCL-3500可用于Northern、EMSA blotting、EMSA等膜交聯(lián),當使用254 nm波長、能量為120.0mJ/cm2交聯(lián)時,尼龍模的氨基和DNA的胸腺嘧啶(或RNA的尿嘧啶)之間形成共價鍵穩(wěn)定。
按壓智能紫外交聯(lián)儀操作面板上program按鍵,選擇能量模式(energy),通過數(shù)字按鍵,輸入需要照射的能量(0.120J/cm2),然后按壓enter按鍵,這樣需要的交聯(lián)能量就成功設置好了,按star按鍵,紫外交聯(lián)儀開始輻照,屏幕顯示剩余能量,交聯(lián)時間結(jié)束后,交聯(lián)儀紫外燈自動停止運行。
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